試験管内でのタウ凝集

タウ蛋白質は微小管を安定化させ、軸索の輸送やシグナル伝達などの重要な構造的・制御的細胞機能に寄与している。 主にタウの束からなる神経原線維のもつれは、アルツハイマー病を含むタウオ病などの神経変性疾患の病因に関与している。

タウ凝集阻害剤を同定するために、Scantoxは高トラフスクリーニングツールとして細胞を含まないアプラオキを提供している。

このアプローチは、タウ凝集アッセイまたは凝集解除アッセイとして実施可能なスペクトロフルオロメトリーリードアウトである。 タウ凝集アッセイは、タウの凝集を緩和できる化合物を同定することを目的としている。 タウ凝集解除アッセイでは、開発化合物がタウ凝集を逆行させることができるかどうかを調べる。

これらのアッセイは、ThioSを含む凝集バッファー中でインキュベートされたリコンビナントTau441（2N4R）P301Lを用いた無細胞in vitroアッセイである。 蛍光強度は465nmの励起と510nmの発光で検出され、タウ凝集の動態をさらに調べるために経時的にモニターすることができる（Quintら、2021）。

図1：P301L変異を持つ組換え2N4Rタウを用いた無細胞THT凝集アッセイ。 A: 凝集アッセイの結果をΔRFU値で示す。 抗体2B11（陰性対照NC、フォイフォリル化タウに特異的）、3E8-1A6（陽性対照PC、微小管結合ドメインを標的とする）、および凝集阻害剤としてのメチレンブルーを評価した。 Dunnettの多重比較検定による一元配置分散分析（One-Way ANOVA）対ビヒクル対照（VC）。 平均値±SEM; n = 6。 ***p<0.001。 B：THTアッセイを用いた経時的なタウ凝集のモニタリング；青色＝ビヒクルコントロール（VC）、青緑色（RI）＝凝集阻害剤としての抗体3E8-1A6。