神経変性疾患におけるミクログリアの重要性はよく知られており、そのためこれらの細胞は新たな薬理学的介入の標的として頻繁に用いられている。
5xFADマウスの単離成体ミクログリア細胞に、pH感受性のpHrodo™Red標識と結合したAβ1-42を添加すると、IncuCyte® Livecellイメージングシステムで赤色蛍光の増加として測定可能な取り込みとリソソーム分解をモニターすることができる。
pHrodo™Redで標識したAβ1-42を添加してからすでに8時間後、5xFADミクログリアは年齢をマッチさせた非トランスジェニックミクログリアと比較して2倍以上の蛍光強度を示し、これは5xFADミクログリアにおけるAβの強力な貪食反応を反映している（図1A）。 非トランスジェニックミクログリアもAβ1-42の貪食を示したが、5xFADミクログリアのこの極めて強い貪食反応は時間とともに持続し、最終的には細胞の上清中に残存するAβ1-42を測定することで確認された。 5xFADミクログリアは、上清中のAβ1-42の有意な減少として観察される非遺伝子組み換えミクログリアと比較して、有意に多くのAβ1-42を取り込んだ（図1B）。
図 1：5xFADおよび非トランスジェニック（ntg）動物の単離成体ミクログリアにおけるAβ1-42貪食能の評価。 pHrodo™Red標識Aβ1-42およびIncuCyte® Livecellイメージングを用いて、Aβ1-42貪食を48時間測定した。 (A). 48時間培養後、同じ細胞の上清を分析し、残存するAβ1-42を調べた（B）。 (B). n=5/群。 平均値±SEM。 両側無対t検定; ***p<0.001。
あるいは、生後早期の初代ミクログリア、マウスミクログリア細胞株BV2、またはiPSC由来のミクログリアも、化合物処理に反応したAβ1-42取り込みを評価するためのpHrodo™ Red貪食アッセイに使用することができる。
さらに、他の疾患関連ペプチドやタンパク質をpHrodo™Redで 標識することも可能です。
図 2 pHrodo™ Red標識Aβ1-42とIncuCyte® Livecellイメージングを用いたBV2細胞におけるAβ1-42貪食の評価。 pHrodo™ Red標識Aβ1-42とインキュベートしたBV2細胞の4時間後のオレンジ蛍光を示す代表的な画像。 スケールバー 200 µM。
したがって、5xFADマウスの成体および生後早期の初代ミクログリア細胞、マウスミクログリア細胞株BV2、iPSC由来のミクログリアは、in vitroでの貪食作用の研究に適している。