BACHDトランスジェニックラットモデル

BACHDラットは、細菌人工染色体(BAC)上に97本のCAA/CAGを交互に繰り返す完全長ヒト変異HTT(mHTT)を過剰発現している。

BACHDラットの最も重要な特徴は以下の通りである:
  • mHTT集合体
  • mHTT RNAレベルの上昇

ポリQ HTT の定量は、MesoScale Discovery 社のサンドイッチ免疫吸着法を用いて行った。トランスジェニック BACHD ラット 1 匹の polyQ HTT を分析したところ、野生型ラットに比べて polyQ HTT レベルが上昇していた。ラット 1 匹の全脳溶解液の希釈系列を測定した(図 1)。

BACHDトランスジェニックラットモデル

図 1:MesoScale Discoveryプラットフォームを用いたサンドイッチ免疫吸着アッセイによるポリQ HTTの定量。 6ヶ月齢のヘミ接合体ラットと非トランスジェニック同腹子の全脳溶解液を、1:10、1:40、1:160、1:640、1:2560の希釈系列で使用した。

BACHDラットに試験化合物を定位注射したところ、BACHDラットの脳内のmHTT mRNAレベルがビヒクル対照と比較して有意に減少した。mHTTタンパク質レベルに対する試験項目の効果も有意であったが、mRNAレベルほど強くはなかった(図2)。これらのデータは、mHTT mRNAレベルだけでなくタンパク質レベルも検査項目によって調整可能であることを検証している。

BACHD Fig2

図2:BACHDラットの試験項目髄腔内注射によるmRNAおよびタンパク質レベルでのmHTT発現。 (A)ビヒクル(VC)または試験項目(TI)で処理した全脳ホモジネートにおけるqRT-PCRによる標的mRNA発現、(B)メソスケールディスカバリー(MSD)アッセイによる標的タンパク質レベルの解析。平均値+SEM(各群n=8); ペアt検定, *p<0.05, ***p<0.001。

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