蛍光in situハイブリダイゼーション（FISH）による遺伝子発現解析

蛍光in situハイブリダイゼーション(FISH)によるmRNAの検出は、免疫蛍光法では検出が困難なタンパク質のための優れた代替法である。
FISHはまた、新しい遺伝子治療法の開発における発現の有効性を分析する方法としても選択されている。
SCANTOXの組織学部門はFISH標識法を確立し、お客様のプロジェクトにこの方法を提供する準備が整いました。
実験は通常の凍結切片で実施できます。
組織切片の多チャンネル免疫蛍光標識の豊富な経験により、多種多様なターゲットに対する数百の試験済み抗体のストックを提供し、FISHとタンパク質ターゲットの免疫蛍光標識の組み合わせが可能です。
1回の実験で、最大4種類のマーカーと細胞核のDAPI染色が可能である。
現在、パーキンソン病のマーカーであるドーパミン受容体D1（図1C）とD2（図1D；それぞれD1RとD2R）、ポンペ病のマーカーである酸性α-グルコシダーゼ（GAA）、ゴーシェ病のマーカーであるグルコシルセラミダーゼβ（GBA、図2C）、さらにパルバルブミンと緑色蛍光タンパク質（GFP）に対するFISHプローブが確立されている。図1：ドーパミンD1
(C)とD2
(D）受容体が、尾状後頭葉（CPu）の中棘ニューロンの異なる集団上で二重FISHにより検出された（それぞれ赤と緑のチャンネル）。
FISHはCD11b抗体を用いたミクログリアの免疫蛍光法と組み合わせた（E、白色チャンネル）。
概要図（A）の小さな四角は、拡大画像（B-E）を撮影した場所を示している。
ミクログリアのマーカーであるCD11b（図1E）とIba1（図2E）、アストロサイトのマーカーであるGFAP、コリンアセチルトランスフェラーゼ（ChAT）、チロシン水酸化酵素（TH）、GBA1（図2D）の抗体標識に成功したことからわかるように、我々のFISHプロトコルは免疫蛍光法と容易に組み合わせることができる。図2：AAV-GBAを片側注入したマウス線条体冠状切片におけるGBAのFISH標識。
GBAプローブ（C、赤チャンネル）が注入部位周辺の右線条体で検出される。
拡大すると、感染細胞でのFISH標識と、同じ細胞でGBA抗体（D、緑色チャンネル）によって検出された高タンパク質レベルを示す。
ミクログリアはIba1抗体（E、白色チャンネル）で標識されている。
概要の小さな四角は、拡大画像（B-E）を撮影した場所を示す。
また、SCANTOXがコントロールデータをマーケティング目的で使用する場合のコラボレーション割引についてもご相談に応じます。