神経変性疾患におけるミクログリアの重要性はよく知られており、そのためこれらの細胞は新たな薬理学的介入の標的として頻繁に用いられている。 この細胞タイプを研究するために、マウスから生後早期のミクログリアを単離することは素晴らしいツールであるが、高齢者や疾患個体の状態を正しく反映するものではない。 そのため、磁気細胞選別法（MACS）を用いて特定の疾患モデルの成体マウス脳から生存可能なミクログリアを単離することは、試験管内でミクログリアを標的とした治療の有効性を評価する新たな可能性を開くものである。 ここでは、9ヵ月齢の5xFADマウスから単離した成体ミクログリアの貪食反応を、年齢をマッチさせた非トランスジェニック（ntg）ミクログリアと比較して調べた。 pH感受性のpHrodo™ Redラベルと結合したAβ1-42をミクログリア細胞に添加すると、IncuCyte® Livecellイメージング・システムで赤色蛍光の増加として測定可能な取り込みとリソソーム分解をモニターすることができる。 pHrodo™ Redで標識したAβ1-42を添加してからすでに8時間後、5xFADミクログリアは年齢をマッチさせたntgミクログリアと比較して2倍以上の蛍光強度を示し、これは5xFADミクログリアにおけるAβの強力な貪食反応を反映している（図1A）。 ntgミクログリアもAβ1-42の貪食反応を示したが、5xFADミクログリアのこの極めて強い貪食反応は時間とともに持続し、最後に細胞の上清中に残存するAβ1-42を測定することで確認された。 5xFADミクログリアは、上清中のAβ1-42の有意な減少として観察されるntgミクログリアと比較して、有意に多くのAβ1-42を取り込んだ（図1B）。図1：5xFADおよびntg動物の単離成体ミクログリアにおけるAβ1-42貪食能の評価。pHrodo™Red標識Aβ1-42とIncuCyte® Livecellイメージングを用いて、Aβ1-42貪食を48時間測定した (A). 48時間培養後、同じ細胞の上清を分析し、残存するAβ1-42を調べた（B）。 (B). n=5/群。 平均値±SEM。 両側無対t検定；***p<0.001。MACSで分離したミクログリアの研究を開始するには、今すぐお問い合わせください！
ロイコトリエンシグナル伝達経路は、もともと喘息における役割で知られている炎症経路であるが、パーキンソン病（PD）を含む様々な神経変性疾患の発症に関与していることが科学的研究により示唆されている。 我々は、承認されている抗喘息薬モンテルカスト（MTK）を用いてロイコトリエンシグナル伝達を遮断することで、パーキンソン病モデルマウスLine 61における運動障害が改善するかどうかを評価した。 実際、MTKを10週間毎日経口投与したLine 61マウスでは、ビヒクル投与したLine 61マウスと比較して、梁歩行試験で評価した運動協調性と平衡感覚の改善が観察された（詳細は2021年3月のニュースレターを参照）。 運動機能の改善を説明する可能性のある細胞の変化を評価するため、試験動物の脳を組織学的に分析した。 小脳と尾状核の両方において、Line 61マウスは非トランスジェニック同腹子よりもミクログリアソーマのサイズが大きいことが観察され（図1 A, D）、ミクログリアの活性化を示した。 さらに興味深いことに、MTKを投与したLine 61マウスは、ビヒクルを投与したLine 61マウスと比較して、両方の脳領域でミクログリアソーマサイズの有意な減少を示した（図1 A, D）。 さらに、MTK処理Line 61マウスの小脳ミクログリアは、ビヒクル処理Line 61マウスと比較して、有意に長いフィラメントとより多くの分岐点を示した（図1 B、C、E、F）。 図1：ビヒクル投与またはモンテルカスト（MTK）投与した非トランスジェニック（ntg）マウスおよびライン61マウスの小脳（CB）および尾状被蓋（CPu）におけるミクログリアの表現型。 ミクログリアソーマのサイズ（A、 D）はImageJを用いて測定した。 フィラメントの長さ（B、 E）と分岐点（C、 F）はIMARISソフトウェアを用いて評価した。 動物1匹につき合計15個のミクログリア細胞を分析した（1群につき5匹；ミクログリアn＝75）。 平均値±SD；ビヒクル処理Line 61群と比較した一元配置分散分析（one-way ANOVA）後のボンフェローニのポストホックテスト、またはビヒクル処理Line 61群と比較したクラスカル・ワリス検定後のダンのポストホックテスト；**p<0.01、***p<0.001。 これらの観察結果は、MTK投与がミクログリアにおいてソーマサイズの縮小とフィラメントの分岐を誘導することを示唆している。 小さな細胞体や高度に隆起した形態は、恒常性維持状態にあるミクログリアの特徴である。 結論として、以前は活性化していたミクログリアが、より恒常的な状態に移行することが、ライン61マウスの運動機能回復に中心的な役割を果たしている可能性がある。 このことは、ミクログリアに対するMTKの作用が、運動の制御と協調に重要な脳領域である小脳で特に顕著であるという事実によって、さらに支持される。 図2：ビヒクル投与およびモンテルカスト（MTK）投与した61系統動物の小脳におけるミクログリアフィラメントの代表的画像。 左のパネルはミクログリアを表すIba1標識（白）のIMARIS 3D画像可視化、右のパネルはフィラメントトレーサーツールを用いた半自動検出後のミクログリアフィラメント。 青いボールポイントはフィラメントの始点（細胞体）を示し、赤いボールポイントは分岐点を示す。 スケールバー：50 µm。
アルポート病マウスモデルの腎臓炎症を可視化するマルチチャンネルイメージング私たちは神経細胞組織のスペシャリストですが、末梢臓器の組織処理も日常的に行っています：アルポート症候群モデルマウスCol4A3-/-の腎臓を、マクロファージと白血球（図1）、Tリンパ球とマクロファージ（図2）で標識し、自動スライドスキャンを行った。図1：マクロファージ（F4/80）と白血球（CD45）の免疫蛍光標識。 A：腎臓全体。 BとC：野生型マウス（B）とCol4A3-/-マウス（C）におけるAの詳細。図2：Tリンパ球（CD3）とマクロファージ（CD68）の免疫蛍光標識。 A：腎臓全体。 BおよびC：野生型マウス（B）およびCol4A3-/-マウス（C）におけるAの詳細。 組織学的実験をする時間が取れないのですか？ 当社の専門家へのアウトソーシングをご検討ください！ 埋め込み 固定されたサンプルを提供し、それを埋め込む RNAフリーの手順もある セクション分けと収集 クライオトームまたはビブラトームによる切断 方向、厚さ、サンプリング方式を選択 免疫組織学と一般染色 4チャンネル免疫蛍光と核のDAPI標識 何百もの確立された抗体 顕微鏡とイメージング 最大5チャンネルのエピ蛍光スライドスキャン 適切な画像管理 定量的画像解析 標識構造の識別と検出 領域と物体の特徴の分析 Scantoxに組織学実験を委託するメリット ラベリングとステインの品質向上 学習効果を高める 柔軟性を高める 時間とお金の節約 リスクを減らす 詳しくは組織学のページをご覧いただくか、お問い合わせください。
CCl4マウスモデルの確立により、新しい抗線維化薬の前臨床試験が可能になる。 肝線維化はほとんどの慢性肝疾患で起こる。 ヒトでは、研究者はすでに肝線維化が可逆的であることを示すことができ、抗線維化薬の開発を促進している。 これらの新薬の有効性を検証するためには、適切な前臨床モデルが必要である。 四塩化炭素（CCl4）は有機塩素化合物で、最も強力な肝毒素の一つとして知られている。 そのため、マウスに肝線維症を誘発する前臨床研究に用いられている。 そこで我々は、この壊滅的な疾患に対する新薬をマウスで試験できるように、CCl4誘発肝線維症モデルを確立した。 7週齢のC57Bl/6JRccHsdマウスにCCl4またはビヒクルを週3回、計9週間i.p.投与した。 投与期間終了時に体重を測定したところ、CCl4投与群とビヒクル投与群の間に有意差は認められなかった（図1A）。 犠牲後、肝臓重量を測定し、体重に対する肝臓重量比を算出したところ、CCl4投与動物は対照動物に比べて肝臓重量が有意に増加していた（図1B）。 典型的な肝線維化マーカーのmRNAレベルを定量したところ、CCl4投与マウスではCol1a1とActa2が非常に増加していた（図2A, B）。 ヒドロキシプロリンアッセイを用いたヒドロキシプロリンタンパク質レベルの評価、および免疫蛍光標識によるCol1a1と平滑筋アクチン（SMA）の評価では、CCl4投与マウスの肝臓では対照と比較してこれらのマーカーが強く増加していた（図2C-E）。図1：CCl4投与およびビヒクル投与したC57Bl/6JRccHsdマウスの体重および肝臓の対体重比。A：体重。 B：肝臓／体重比。 非対t検定。 n=6/群；平均+SEM。 ***p<0.001; n.s.：有意ではない。図2：CCl4処理後の典型的な肝疾患マーカーの発現レベル。 (A)とActa2 (B). レベルは、HKG HPRTおよびビヒクル群に対する2^(-ΔΔCT)法を用いたx-倍変化として示した。 C：ヒドロキシプロリンタンパク質レベル（ng/μl）。 Col1a1 (D)とSMA (E）免疫反応性（IR）面積（％）。 A-E：すべてのマーカーは9週間のCCl4またはビヒクル投与後の肝臓で測定した。 n = 5/6/群; 平均 + SEM; *p<0.05, **p<0.01, ***p<0.001。
樹状突起スパイン解析を簡素化するために、我々の組織学チームとITチームが協力し、評価者に依存しない、偏りのない、高速で効率的な樹状突起スパインの自動定量化のためのマクロベースの画像解析を開発した。 脳切片はGolgi-Cox法で染色。 スパイン密度解析のため、63倍のオイルレンズでZスタック画像を撮影し、Zeiss ZENソフトウェアでスタックを折りたたむ。 棘はImage Pro 10ソフトウェアで実行されるマクロによって自動的に検出され、定量化される。 脊椎密度解析は、様々なヒト疾患やそのモデル動物に関連する研究に有用である： 筋萎縮性側索硬化症のSOD1G93Aマウスモデルにおける脊椎密度解析。 Fogartyet al. 2016. https://doi.org/10.1186/s40478-016-0347-y 認知的に正常な加齢において、樹状突起スパインのリモデリングがアルツハイマー病の病態と遺伝的感受性を伴う。 Boros et al. https://doi.org/10.1016/j.neurobiolaging.2018.09.003 自閉症スペクトラム障害の近交系モデルとしてのBTBR T+ tf/Jマウスを含む、神経発達障害におけるスパインダイナミクスと回路機能の共通欠損を解析。 中井ら 2018. https://doi.org/10.3389/fnins.2018.00412 図：脊椎の認識と脊椎密度分析。 A：前頭皮質錐体細胞のゴルジコックス染色樹状突起のZスタック画像。 B: 樹状突起セグメントの長さが決定され（緑色の線）、次にスパインが同定され、自動的にカウントされた。 この画像から生成されたデータを右側に示す。ゴルジ-Cox 染色に関する研究組織の評価については、今すぐお問い合わせください！
SCANTOXの研究開発チームによる最新の結果では、hA53Ttgマウスにおける重度かつ極めて早期の運動障害が検証されており、このモデルは前臨床パーキンソン病（PD）研究に適しています。 PDは21世紀において最も壊滅的な神経変性疾患に属する。 したがって、疾患の進行を止める新薬の開発は、PD研究の最大の焦点である。 これらの新薬を試験するためには、適切な動物モデルが必要である。 hA53Ttgα-シヌクレイントランスジェニックマウスモデルは、マウスThy-1プロモーターの制御下でA53T変異ヒトα-シヌクレインを発現し、最も重要な表現型症状を模倣している。 従って、このモデルは入手可能なPDモデルの中で最も優れている。 hA53Ttgマウスの3つの異なる年齢群における行動学的解析から、梁歩行試験で解析したように、2ヶ月齢ですでに運動障害が発症していることが明らかになった（図1A, B）。 hA53Ttgマウスは、2ヶ月齢の時点で非トランスジェニック(ntG)マウスと比較して、梁を横切る時間と梁の上を歩く際のスリップの回数が有意に増加していた。 年齢が上がるにつれて、hA53Ttgマウスはこれらのパラメータでさらに悪い成績を示したが、ntgsは安定した成績を示した。 ロータロッド試験におけるhA53Ttgマウスの評価は、生後4ヶ月で初めて有意な欠損を示し（図1C）、その後ビームウォーク試験と比較した。 hA53Ttgマウスのワイヤーハンギングテストにおける運動強度の評価では、生後2ヶ月ですでに非常に深刻な欠損が認められ、それ以上は年齢とともに増加しなかった（図2A）。 最後に、hA53Ttgマウスの口腔欠損をパスタ齧りつき試験で評価した。 エピソードごとの咬みつきを評価したところ、4ヵ月齢の時点でhA53Ttgマウスはntg同腹子に比べ有意に成績が悪かった（図2B）。 月齢が高くなるとntgマウスの成績が低下するため、この差は月齢とともに減少した。 結論として、これらの結果は、hA53Ttgマウスが筋力低下と口腔筋欠損を含む非常に重篤な運動表現型を示すことを示している。 図1：hA53TtgマウスのビームウォークとRotaRodテストにおける運動障害。 ビームを横切る時間 (A）とスリップ回数 (B)、ロタロッド試験におけるロッドからの落下時間(C) (C). 各群n = 23-24。 二元配置分散分析（Bonferroniのポストホックテスト付き）；平均値＋SEM；***p<0.001。図2：hA53Ttgマウスのワイヤーハンギングテストおよびパスタ齧りつきテストにおける筋力および運動障害。ワイヤーハンギングテストで観察されたワイヤーハンギング時間 (A)およびパスタ齧りつき試験における1回あたりの咬傷数 (B). n=23-24/群。 二元配置分散分析（Bonferroniのpost hoc検定付き）；平均＋SEM；**p<0.01；***p<0.001。
SCANTOXでは、イタリア・バーリ大学のマルチェロ・レオポルド教授との共同研究により、FFG資金による博士論文の最新の結果が発表され、脆弱X症候群に見られる神経行動障害をモデル化するためのFmr1ノックアウト（KO）マウスの価値が確認されました。 脆弱X症候群は、最も一般的な遺伝性知的障害であり、自閉症スペクトラム障害（ASD）の単発性原因である。 知的障害や社会性の障害といったFXSの基本的な症状以外にも、多動、反復行動、異常な感情処理といった二次的な表現型がみられる。 Fmr1-KOマウスの行動解析から、オープンフィールド試験で解析されたように、Fmr1-KOマウスでは活動性が亢進し、多動性が見られた（図1A, B）。 このテストでは、Fmr1-KOマウスはC57BL/6JRjコントロールマウスと比較してアリーナの中央にいる時間が長く、不安様行動が減少していることが示された（図1C）。 この結果を検証するため、Fmr1-KOマウスをさらに高架式十字迷路で評価した。 その結果、Fmr 1-KOマウスはC57BL/6JRj対照マウスに比べて、迷路のオープンアームにいる時間が長く、オープンアームに入る頻度も高いことから、Fmr1-KOマウスでは不安が強く減少していることが示された（図1D-E）。 最後に、博士課程の学生Shirin Sharghiは、反復行動の指標としてFmr1-KOマウスのオートグルーミング行動を評価した。 Fmr1-KOマウスはC57BL/6JRjコントロールマウスと比較して、有意に多くのグルーミングエピソードを示し、グルーミングに費やす時間も有意に長かった。 試験の直前にGABA作動性薬物R-バクロフェンを投与すると、Fmr1-KOマウスのオートグルーミング行動をコントロールレベルまで減少させることができた（図2A, B）。 結論として、Shirinは、Fmr1-KOマウスは活動性、多動性、不安、反復行動に著しい変化を示し、後者はR-バクロフェンによる急性治療で改善できることを示すことができた。図1：C57BL/6JRj対照マウスと比較した7週齢の雄性Fmr1-KOマウスの活動性、多動性、不安。活動性 (A)、多動性 (B)、および中心で過ごした時間(C) (C）をオープンフィールドテストで測定した。 オープンアームでの滞在時間 (D）、オープンアームに入る頻度 (E）を高架式十字迷路試験で測定した。 各群n = 15。 p<0.05、**p<0.01。図2：雄性Fmr1-KOマウスの7週齢におけるR-バクロフェンまたはビヒクル投与後のオートグルーミング。グルーミングエピソード数 (A）とグルーミング時間 (Fmr1-KOマウスとC57BL/6JRjコントロールマウスのグルーミング回数（A）とグルーミング時間（B）。 各群n = 15。 一元配置分散分析、Bonferroniの多重比較検定；平均値＋SEM；**p<0.01；***p<0.001。Fmr1-KOマウスの試験をご希望の方は、今すぐお問い合わせください！
SCANTOXのFFG資金による博士論文において、Shirin Sharghiはイタリア、バーリ大学のMarcello Leopoldo教授と協力し、自閉症スペクトラム障害（ASD）のBTBR T+ Itpr3tf/Jマウスの行動特性を明らかにした。 BTBR T+Itpr3tf/Jマウスは、LP-211（セロトニン作動性化合物）、R-バクロフェン（GABA作動性薬物）またはビヒクルの3つの異なる治療群に割り付けられた。 すでに6週齢の時点で、ビヒクルを投与したBTBRマウスは、C57BL/6JRjマウスと比較して、30分間の試験中、ジグモタキシス（Thigmotaxis）、飼育回数、飼育時間、オープンフィールド箱の中央にいる時間が有意に長かった（図1）。 これらのデータから、BTBR動物では不安が高く、非選択的注意／恐怖様行動が損なわれていることが示された。 LP-211およびR-バクロフェン投与は、これらのパラメータに有意な影響を与えなかった。 高架式十字迷路試験では、10週齢のC57BL/6JRj動物に比べ、ビヒクル投与BTBRマウスでは、閉じたアームへの進入速度が速く、進入回数が多いことから、不安やストレス関連行動が高いことが示唆された（図2）。 中心ゾーンに入る頻度の増加は、さらにBTBRマウスにおける反復行動を示している可能性がある。 LP-211投与は、これらの影響をわずかに改善することができた。 反復行動を検証するために、ビヒクル処理したBTBRマウスを10週齢でグルーミング行動について試験した。 解析の結果、C57BL/6JRjマウスと比較してグルーミング持続時間が有意に長いことが明らかになった。 LP-211およびR-バクロフェン投与後、グルーミング時間が減少する傾向が観察された。 しかし、グルーミングイベント数は全群で同程度であった（図3）。 結論として、Shirinは、BTBR T+ Itpr3tf/JマウスがC57BL/6JRjマウスに比べて高い不安と反復行動を示す一方、今回適用した濃度のLP-211とR-バクロフェンを1回注射しても、この表現型をほとんど改善できないことを示すことができた。 これらの結果は、BTBRマウスが典型的なASD症状を研究するのに適したモデルであることを示唆している。 図1：オープンフィールドテスト。 チグモタキシス (A）、飼育数 (B）、飼育時間 (C）、センターでの滞在時間 (D). 動物は30分間記録し、5分間隔で評価した。 平均値±SEM。 <<<二元配置分散分析（Two-way ANOVA）後、Bonferroniのポストホック検定を行った。図2：高架式プラス迷路試験。速度 (A)、閉じた腕への進入回数 (B)、中央ゾーンへの進入回数 (C). 平均値＋SEM。 一元配置分散分析（One-way ANOVA）、次いでクラスカル・ワリス（Kruskal-Wallis）。 (A)およびBonferroniの(BおよびC)事後検定。 C)post hoctest; all versus B; *p<0.01。図3：グルーミング・テスト。グルーミングの持続時間 (A）、グルーミング・エピソード (B). 平均値＋SEM。 一元配置分散分析（One-way ANOVA）およびクラスカル・ワリスポストホック検定（Kruskal-Wallispost hoctest）；すべて対B；***p<0.001。BTBRマウスモデルでの研究をご希望の方は、今すぐお問い合わせください！
グリコーゲン貯蔵病II型(GSD II)は、ポンペ病とも呼ばれる、病気の進行速度が様々な、まれな多系統の病気である。 酸性α-グルコシダーゼ(GAA)遺伝子の変化によって起こり、その結果、この酵素のレベルが低下し、グリコーゲンの分解が低下するため、主に様々な筋肉組織にグリコーゲンが蓄積する。 最も一般的な症状としては、心機能障害、筋力低下、筋緊張低下、呼吸障害、生命予後の大幅な低下などがある。 このライソゾーム貯蔵病をモデル化するために、我々は、GAA酵素レベルが低下し、その結果さまざまな筋肉組織でグリコーゲンの蓄積が進行するGaaノックアウトマウス6neo系統を解析した。 筋力および運動障害の予備的解析から、6neoマウスは24週齢の時点で、野生型同腹子と比較してワイヤーぶら下がり試験で筋力が低下していることが示された（A）。 握力テストでは、6neoマウスは8週齢ですでに有意差が観察され、年齢とともに徐々に悪化している（B）。 ビームウォークテストを用いた運動障害の評価では、6neoマウスは野生型同腹子に比べ、24週齢で滑る頻度が高いことが明らかになった（C+D）。 この結果は、6neoマウスがポンペ病患者で観察される筋肉の表現型を忠実に模倣していることを示唆しており、このマウスはこの壊滅的な疾患に対する新規化合物を評価する有用なツールとなる。図：ポンペ病モデル6neoマウスの筋肉および運動障害。8週齢と24週齢の6neoマウスを用い、ワイヤーハンギングテストでぶら下がる時間を測定した。 (A）、握力試験における平均握力（B (B）、スリップ回数 (C)および速度ごとのスリップ回数 (C+D）。 WT: n = 24;6neo: n = 48; 平均値 + SEM; 二元配置分散分析後、Bonferroniの多重比較ポストホック検定; **/##p<0.01, ***/##p<0.001; *遺伝子型間の有意性; #年齢群間の有意性。 酵素や基質レベル、生存率など、6neoマウスの病理学的特徴のさらなる解析は現在進行中である。6neo マウスの研究を開始するには、今すぐお問い合わせください！
パーキンソン病(PD)は、線条体のドーパミンレベルの低下により重度の運動障害を引き起こすのが特徴である。 そのため、患者はドーパミンを含むカテコールアミンの前駆体であるL-DOPAで治療されることが多いが、この治療によるプラスの効果は、治療が長期化するにつれて薄れていき、ジスキネジアを引き起こす。 このL-DOPA治療のプライミング効果をin vivoでモデル化するために、Wistar Hanラットを利用することができる。 動物は、典型的なPD症状を誘発するために、内側前脳束に6-ヒドロキシドパミン（6-OHDA）を注射して片側病変させる。 L-DOPAプライミングのために、ラットは病変の3週間後から21日間L-DOPAを腹腔内投与される。 L-DOPA誘発性ジスキネジア(LID)の評価には、プライミング段階から約2週間後に、ビヒクル、3mg/kg、6mg/kgのL-DOPAをラットに1回投与し、その後ALO試験で軸索、四肢、嗅覚の異常不随意運動を評価する。 さらに、対側回転を評価するために、ラットをロトメーターボウルでテストした。 その結果、L-DOPAはALOスコアの強い上昇を誘導した。 (A)、対側回転 (B)はビヒクル投与ラットと比較して増加した。 さらに、この効果はL-DOPAの濃度に強く依存していた。 図：ICV 6-OHDA注射とL-DOPAプライミング後のALOと回転テスト。 ALOスコア (A）と対側回旋の割合 (B)急性L-DOPA投与後。 n = 6/群; 平均 + SEM; 二元配置分散分析にTukeyの多重比較ポストホック検定を加えたもの（A）および一元配置分散分析にTukeyの多重比較ポストホック検定を加えたもの; *p<0.05, ***p<0.001.L-DOPAプライミング試験の開始については、今すぐお問い合わせください！
老化は、生理機能が徐々に低下し、病気にかかりやすくなることを特徴とする複雑な生物学的プロセスである。 細胞老化は老化の根底にある基本的なメカニズムであり、細胞はストレスや損傷に応答して不可逆的に分裂を停止し、時間の経過とともに組織の機能不全を引き起こす。 老化は、傷害を受けた細胞の増殖を防ぐことにより、腫瘍形成に対して保護的な役割を持つ一方で、老化細胞の蓄積とその炎症性分泌物は、老化の過程と加齢に関連した疾患の発症に重要な役割を果たしている。 老化関連β-ガラクトシダーゼ（β-Gal）活性のような重要なマーカーは、老化細胞を同定し研究するための貴重なツールとなる。 さらに、主にオートファジーに関与することが知られているp62（SQSTM1としても知られている）は、最近、老化の促進や加齢に関連した病態と関連している。 そこで我々は、老化が加速することで知られるモデル生物であるSAMP8マウスの大脳皮質におけるこれらのマーカーを、老化抵抗性対照マウス（SAMR1）と比較して調べた。 そこで、SAMP8マウスとSAMR1マウスの5ヶ月齢と9ヶ月齢の大脳皮質において、β-Gal活性とp62レベルという2つの重要なバイオマーカーを定量した。 予想通り、SAMP8マウスの大脳皮質では、SAMR1マウスに比べてβ-Gal活性が両齢で有意に上昇しており、SAMP8マウスでは細胞老化が進んでいることが示された（図1 A). 同様に、p62レベルもSAMP8マウスでは両年齢群で有意に上昇しており、SAMR1マウスに比べてSAMP8マウスではさらにオートファジー過程が早期から変化していることが示唆された（図1 B).図1：SAMP8マウスとSAMR1マウスの5ヶ月齢と9ヶ月齢の大脳皮質における老化とオートファジーのマーカー。 β-ガラクトシダーゼ（β-Gal）活性 (A）とp62タンパク質レベル (B）は、生後5ヶ月および9ヶ月のSAMP8およびSAMR1対照動物（各群n=4-8）の皮質サンプルで評価した。 二元配置分散分析（Two-way ANOVA）後、ボンフェローニのポストホック検定を行った。 平均値±SEM。 **p<0.01; ***p<0.001。 老化におけるこれらのマーカーとその役割を理解することは、老化研究と治療開発における大きな進歩につながる。SAMP8マウスを用いた老化研究をご希望の方は、今すぐ弊社までご連絡 ください！
活動性、多動性、不安、反復行動の増加を示すFmr1-KOマウスの主な表現形質を評価した後（BehaviorNewsletter）、今度は若いFmr1-KOマウスの脳病理学的特徴を評価した。 Fmr1-KOマウスでは、エクソン5のFmr1遺伝子が、ネオマイシン耐性カセットを持つ200以上のCGGリピートで置換されている。 このように、動物は、知的障害の中で最も頻繁に遺伝し、自閉症スペクトラム障害（ASD）の単発性原因である脆弱X症候群をモデル化するための貴重な遺伝学的ツールとなる。 Fmr1-KOマウスにおける疾患関連行動の変化を検証した後、我々は疾患特異的バイオマーカーに焦点を当て、セロトニン情報伝達経路のマーカーであるセロトニントランスポータータンパク質（5-HTT）、介在ニューロンのマーカーであるパルバルブミン（PV）、ミクログリアのマーカーであるIba1、アストロサイトのマーカーであるGFAPのレベルについて、異なる脳領域を評価した。 その結果、7週齢において、Fmr1-KOマウスの尾状後頭葉では、C57Bl/6Jマウスと比較して5-HTTレベルが有意に上昇していた（図1B）一方、大脳皮質と海馬のレベルには変化がなかった（図1A、C）。 同年齢のFmr1-KOマウスのPVレベルを評価した結果、大脳皮質では有意に増加したが（図1E）、尾状被蓋と海馬のレベルは変化しなかった（図1F, G）。 海馬の5-HTT標識と大脳皮質のPV標識の代表画像を図1DとHに示す。図1：7週齢のFmr1-KOマウスとC57BL/6Jマウスにおけるセロトニントランスポータータンパク質（5-HTT）とPVの定量。 大脳皮質における5-HTT発現量（A-C）とパルバルブミン（E-G）（A、 E）、尾状被蓋（B、 F）および海馬（C、 G）におけるパルバルブミン（E-G）。 C57BL/6JおよびFmr1-KOの脳切片のDAPI（青）、海馬の5-HTT（赤、D）または大脳皮質のPV（緑、H）の代表画像。 対応のないt検定。 各群n = 5。 平均値＋SEM。 *p<0.05。 CX、大脳皮質；HC、海馬；PV、パルバルブミン。 さらに、Fmr1-KOマウスにおけるIba1免疫反応性を定量したところ、尾状被蓋（図2B）で有意な増加が認められたが、大脳皮質と海馬では認められなかった（図2A、C）。これは、尾状被蓋における神経炎症のマーカーとして、活性化ミクログリアが著しく増加していることを示している。 Fmr1-KOマウスのGFAP免疫反応性を解析したところ、大脳皮質と尾状被蓋では変化が見られなかったが（図2E、F）、海馬ではGFAPレベルが有意に上昇した（図2G）。 尾状被蓋におけるIba1標識と海馬におけるGFAP標識の代表画像を図2DとHに示す。図2： 7週齢のFmr1-KOマウスとC57BL/6JマウスにおけるIba1とGFAPの定量。 大脳皮質（A、 E）、尾状被蓋（B、 F）および海馬（C、 G)におけるGFAP(E-G)およびGFAP(A-C)のレベルを免疫反応面積(%)で評価した。 C57BL/6JとFmr1-KOの脳切片の尾状被蓋におけるNeuN（青）とIba1（緑、D）、海馬におけるDAPI（青）とGFAP（緑、H）の代表画像。 対応のないt検定。 n=5/群。 平均値＋SEM。 **p<0.01; ***p<0.001。 CPu；尾状被蓋；HC；海馬。 まとめると、これらのデータは、 Fmr1-KOマウスはセロトニンシグナル伝達と介在ニューロンのネットワークが障害され、明らかな神経炎症病態を示すことを示している。 興味深いことに、観察されたすべての病態は高度に領域特異的であり、このマウスは新規ASD化合物の有効性を分析する理想的なモデルである。Fmr1-KOマウスの研究をご希望の方は、今すぐ弊社までご連絡 ください！