神経変性疾患におけるミクログリアの重要性はよく知られており、そのためこれらの細胞は新たな薬理学的介入の標的として頻繁に用いられている。 この細胞タイプを研究するために、マウスから生後早期のミクログリアを単離することは素晴らしいツールであるが、高齢者や疾患個体の状態を正しく反映するものではない。
そのため、磁気細胞選別法(MACS)を用いて特定の疾患モデルの成体マウス脳から生存可能なミクログリアを単離することは、試験管内でミクログリアを標的とした治療の有効性を評価する新たな可能性を開くものである。
ここでは、9ヵ月齢の5xFADマウスから単離した成体ミクログリアの貪食反応を、年齢をマッチさせた非トランスジェニック(ntg)ミクログリアと比較して調べた。
pH感受性のpHrodo™ Redラベルと結合したAβ1-42をミクログリア細胞に添加すると、IncuCyte® Livecellイメージング・システムで赤色蛍光の増加として測定可能な取り込みとリソソーム分解をモニターすることができる。
pHrodo™ Redで標識したAβ1-42を添加してからすでに8時間後、5xFADミクログリアは年齢をマッチさせたntgミクログリアと比較して2倍以上の蛍光強度を示し、これは5xFADミクログリアにおけるAβの強力な貪食反応を反映している(図1A)。
ntgミクログリアもAβ1-42の貪食反応を示したが、5xFADミクログリアのこの極めて強い貪食反応は時間とともに持続し、最後に細胞の上清中に残存するAβ1-42を測定することで確認された。
5xFADミクログリアは、上清中のAβ1-42の有意な減少として観察されるntgミクログリアと比較して、有意に多くのAβ1-42を取り込んだ(図1B)。図1:5xFADおよびntg動物の単離成体ミクログリアにおけるAβ1-42貪食能の評価。pHrodo™Red標識Aβ1-42とIncuCyte® Livecellイメージングを用いて、Aβ1-42貪食を48時間測定した
(A).
48時間培養後、同じ細胞の上清を分析し、残存するAβ1-42を調べた(B)。
(B).
n=5/群。
平均値±SEM。
両側無対t検定;***p<0.001。MACSで分離したミクログリアの研究を開始するには、今すぐお問い合わせください!