RNA 결합 단백질 TDP-43은 근위축성 측삭 경화증 (ALS) 및 전측두엽 변성(FTLD)과 같은 신경 퇴행성 질환과 밀접한 관련이 있습니다. 여러 연구에 따르면 세포질 TDP-43 응집체는 스트레스 과립 마커와 공동 위치하는 것으로 나타났습니다. 스트레스 과립(SG)은 세포가 스트레스를 받는 동안 일부 RNA의 번역을 억제하는 세포질 내포물입니다. SG 형성이 TDP-43의 축적에 기여한다는 것이 밝혀졌기 때문에 SG 형성 억제 및/또는 TDP-43의 SG로의 모집은 현재 루게릭병 연구의 초점이 되고 있는 경로입니다.
시험관 내에서 루게릭병을 모델링하기 위해 TDP-43을 과발현하는 신경모세포종 세포를 잘 설명된 SG 유도제인 비소나트륨(SA)으로 처리할 수 있습니다. 그런 다음 SA 처리 시 수용성에서 불용성 TDP-43 종으로 강하게 이동하는 것을 보여주는 단백질 단순 WES 기술을 통해 TDP-43 응집을 측정합니다(그림 1).
그림 1. 비소나트륨(SA) 처리가 수용성 및 불용성 TDP-43 수준에 미치는 영향. SA 또는 차량 처리 후 세포를 채취하고 용해성 및 불용성 단백질 분획을 분리했습니다. 두 분획 모두 단백질심플 WES에서 TDP-43에 대해 분석했습니다. 가용성 및 불용성 분획에서 TDP-43 신호의 WES 레인 뷰.
또한 SG 형성과 TDP-43 모집은 면역세포화학으로 분석할 수 있습니다(그림 2). SG 마커 G3BP에 대한 면역세포화학 염색은 각 차량 대조군에 비해 SA 처리된 세포에서 상당한 SG 형성을 보여주며(그림 2), 사이클로헥시마이드는 SG 형성을 상쇄할 수 있습니다(그림 2, 맨 아래 줄).
그림 2. 스트레스 과립 마커 G3BP(주황색) 및 인간 TDP-43(녹색)에 염색된 차량(VC 0.1% DMSO), 200µM 비소나트륨(SA) 및 SA 병변과 10µM 시클로헥시미드(CHX)로 처리한 SH-TDP-43 세포의 대표 이미지입니다. 눈금 막대 100 µm.
또한 핵에서 세포질로의 TDP-43 국소화의 변화는 면역세포화학에 의한 접근법, WES 분석 또는 이미지 기반 중 하나를 사용하여 평가할 수 있습니다.
