신경 퇴행성 질환에 대한 미세아교세포의 중요성은 잘 알려져 있으며, 따라서 이 세포는 새로운 약리학적 개입의 표적으로 자주 사용됩니다.
5xFAD 마우스의 분리된 성체 미세아교세포에 pH에 민감한 pHrodo™ Red 라벨과 결합된 Aβ1-42를 추가하면 흡수 및 리소좀 분해를 모니터링할 수 있으며, 이는 인큐사이트 라이브셀 이미징 시스템에서 붉은 형광의 증가로 측정할 수 있습니다.
Aβ1-42로표지된 pHrodo™ Red를 첨가한 후 8시간이 지나자 5xFAD 미세아교세포는 연령이 일치하는 비형질전환 미세아교세포에 비해 2배 이상의 형광 강도를 보였으며 이는 5xFAD 미세아교세포에서 Aβ의 강력한 식세포화를 반영합니다(그림1A). 비형질전환 미세아교세포도 Aβ1-42의식세포화를 보였지만, 5xFAD 미세아교세포의 이러한 매우 강력한 식세포 반응은 시간이 지나도 지속되었고 마지막에는 세포 상청액에 남아있는 Aβ1-42를측정하여 확인되었습니다. 5xFAD 미세아교세포는 비형질전환 미세아교세포에 비해 훨씬 더 많은 Aβ1-42를흡수하여 상청액에서 현저히 감소된 Aβ1-42를관찰할 수있었습니다(그림1B).
그림 1: 5xFAD 및 비형질전환(ntg) 동물의 분리된 성인 미세아교세포에서 Aβ1-42 식세포증 평가. Aβ1-42 식세포증은 48시간 동안 pHrodo™ Red 라벨이 부착된 Aβ1-42 및 IncuCyte® 라이브셀 이미징을 사용하여 측정했습니다. (A). 48시간 배양 후, 동일한 세포의 상청액을 분석하여 잔류 Aβ1-42를 분석했습니다. (B). 그룹당 n=5. 평균 ± SEM. 두 꼬리 비쌍검정 t-검정; ***p<0.001.
또는 생후 초기 일차 미세아교세포, 생쥐 미세아교세포주 BV2 또는 iPSC 유래 미세아교세포도 화합물 처리에 대한 Aβ1-42흡수 평가를 위해 pHrodo™ Red 식세포증 분석에 사용할 수 있습니다.
또한 다른 질병 관련 펩타이드 및 단백질의 라벨링도 pHrodo™Red로 가능합니다.
그림 2 Aβ1-42가 표지된 pHrodo™ Red 및 IncuCyte® 라이브셀 이미징을 사용한 BV2 세포의 Aβ1-42 포식작용 평가. 4시간 후 Aβ1-42가 표지된 pHrodo™ Red로 배양된 BV2 세포의 주황색 형광을 보여주는 대표 이미지. 스케일 바 200 µM.
따라서 성체 및 출생 후 초기 5xFAD 생쥐의 일차 미세아교세포, 생쥐 미세아교세포주 BV2 및 iPSC 유래 미세아교세포는 시험관 내에서 식세포 작용을 연구하는 데 매우 적합합니다.