타우 단백질은 미세소관을 안정화시키고 축삭 수송 및 신호 전달과 같은 주요 세포 구조 및 조절 기능에 기여합니다. 주로 타우 다발로 구성된 신경섬유 엉킴은 알츠하이머병을 포함한 타우 병증과 같은 신경 퇴행성 질환의 발병에 관여합니다.
타우 응집 억제제를 식별하기 위해 SCANTOX는 높은 트로프 스크리닝 도구로 세포가 없는 appraoch를 제공합니다.
이 접근법은 타우 응집 또는 응집 해제 분석으로 수행할 수 있는 분광 형광 측정 판독법입니다. 타우 응집 분석은 타우의 응집을 완화할 수 있는 화합물을 식별하는 것을 목표로 합니다. 타우 응집 제거 분석은 발달 화합물이 타우 응집을 역전시킬 수 있는지 여부를 조사합니다.
이 분석은 재조합 Tau441(2N4R) P301L을 사용하여 세포가 없는 시험관 내 분석으로, ThioS를 포함한 응집 완충액에서 배양합니다. 형광 강도는 465nm 여기 및 510nm 방출에서 감지되며 시간이 지남에 따라 모니터링하여 Tau 응집의 동역학을 추가로 조사할 수 있습니다(Quint et al., 2021).
그림 1: P301L 돌연변이가 있는 재조합 2N4R 타우를 사용한 무세포 THT 응집 분석. A: ΔRFU 값으로 표시된 응집 분석 결과. 응집 억제제로서 메틸렌 블루뿐만 아니라 항체 2B11(음성 대조군 NC, 인산화 타우에 특이적), 3E8-1A6(양성 대조군 PC, 미세소관 결합 도메인을 표적으로 함)을 평가했습니다. Dunnett의 다중 비교 테스트와 차량 대조군(VC)을 사용한 일원 분산 분석(One-Way ANOVA). 평균 ± SEM; n = 6. ***p<0.001. B: THT 분석법을 사용하여 시간에 따른 타우 응집 모니터링; 파란색 = 차량 대조군(VC), 청록색(RI) = 응집 억제제로서 항체 3E8-1A6.