유전자 발현 분석을 위한 형광 현장 혼성화(FISH)

면역 형광으로 검출하기 어려운 단백질의 경우 형광 현장 혼성화(FISH)를 통한 mRNA 검출이 훌륭한 대안이 될 수 있습니다.
또한 새로운 유전자 치료법을 개발하는 과정에서 발현 효능을 분석하기 위해 선택되는 방법이기도 합니다.
따라서 SCANTOX의 조직학과는 FISH 라벨링 방법을 확립했으며, 이제 이 방법을 프로젝트에 사용할 수 있도록 제공할 준비가 되었습니다.
실험은 일반 냉동 섹션에서 실행할 수 있습니다.
조직 절편의 다중 채널 면역 형광 라벨링에 대한 방대한 경험을 바탕으로 다양한 표적에 대한 수백 개의 테스트 항체 재고를 제공하므로 단백질 표적의 면역 형광 라벨링과 FISH를 조합하여 수행할 수 있습니다.
한 실험에서 최대 4개의 서로 다른 마커와 세포 핵의 DAPI 염색을 사용할 수 있습니다.
현재 파킨슨병의 마커로 도파민 수용체 D1(그림 1C) 및 D2(그림 1D; 각각 D1R 및 D2R), 폼페병의 마커로 산 α-글루코시다제(GAA), 고셔병의 마커로 글루코실 세라미다제 β(GBA, 그림 2C)와 파발부민 및 녹색 형광 단백질(GFP)에 대한 FISH 프로브를 확립하고 있습니다. 그림 1: 도파민 D1
(C) 및 D2
(D) 수용체는 이중-FISH(각각 빨간색 및 녹색 채널)를 통해 꼬리돌기(CPu)의 다양한 중간 가시 뉴런 집단에서 검출되었습니다.
FISH는 CD11b 항체(E, 흰색 채널)를 사용하여 미세아교세포의 면역 형광과 결합되었습니다.
개요(A)의 작은 직사각형은 확대된 이미지가 촬영된 위치를 보여줍니다(B-E).
우리의 FISH 프로토콜은 미세아교세포 마커 CD11b(그림 1E) 및 Iba1(그림 2E), 성상세포 마커 GFAP, 콜린 아세틸 전이효소(ChAT), 티로신 하이드 록실 라제(TH) 및 GBA1(그림 2D)에 대한 추가적인 성공적인 항체 라벨링에서 알 수 있듯이 면역형광과 쉽게 결합할 수 있습니다. 그림 2: AAV-GBA를 일방적으로 주입한 쥐 선조체 관상절에서 GBA의 FISH 라벨링.
GBA 프로브(C, 빨간색 채널)가 주사 부위 주변의 오른쪽 선조체에서 검출됩니다.
확대하면 감염된 세포의 FISH 라벨링과 같은 세포에서 GBA 항체(D, 녹색 채널)에 의해 검출된 높은 단백질 수준을 보여줍니다.
미세아교세포는 Iba1 항체에 의해 표지되어 있습니다(E, 흰색 채널).
개요의 작은 직사각형은 확대 이미지(B-E)가 촬영된 위치를 나타냅니다.
문의를 환영하며, 대조군 데이터를 마케팅 목적으로 사용할 수 있는 경우 Scantox에서 협업 할인에 대해 논의할 수 있습니다.