成長因子除去アッセイは、アポトーシスに関連する神経学的状態を研究するための貴重なツールとして浮上してきた。 神経細胞の培養は、そのサブタイプにもよるが、生存能力と健全性を維持するために、複数の成長因子の代替に依存している。
B27は、神経細胞の生存と機能をサポートする必須成長因子と栄養素を含む、神経細胞培養サプリメントとして広く使用されている。 初代皮質ニューロンの培養液からB27を除去することで、神経変性疾患、虚血性損傷、発達障害、ニューロン老化、神経炎症状態などの特定の神経学的状態における成長因子欠乏の影響を模倣することができる。
成長因子離脱アッセイにより、神経細胞の生存率、形態、機能性、複数の神経疾患に関与するシグナル伝達経路など、成長因子の欠乏による影響を調べることができる。
B27を中止すると、マウスの皮質ニューロンの細胞生存率が低下する（図1）。 この効果は、脳由来神経栄養因子（BDNF）で処理することで逆転させることができる。
図1：B27の投与中止によるマウス大脳皮質ニューロンの代謝活性アッセイ（MTT）。 データは群平均値（n=6）として表示し、ビヒクル対照に対するパーセントで表した。 BDNFの最高濃度（BDNF-2～-4）は、細胞の生存率を有意に増加させた。 一元配置分散分析（One-way ANOVA）とダンネットのポストホック 検定。 ***P<0.001。
アポトーシス（図2A）とネクローシス（図2B）に対する成長因子の休薬効果は、YO-PRO™-1ヨウ化物アッセイで評価できる。 マウス大脳皮質ニューロンの解析から、この影響はBDNF処理によって逆転できることがわかった（図2）。
図 2：アポトーシス細胞を検出するためのYO-PRO™-1ヨウ化物アッセイ (A)と壊死細胞のPI染色との組み合わせ (B). データは群平均値（n=5）として表示し、ビヒクル対照に対するパーセントで表した。 BDNFはB27除去後の壊死細胞とアポトーシス細胞の量を有意に減少させた。 対応のないt検定：*p<0.05 **P<0.01。
さらに、B27離脱によるアポトーシスは、Incucyte®ライブセルイメージングシステムを用いてライブセルでモニターすることができる。
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